Spørsmål om gjær og gjæring

Det gleder meg å høre at folk begynder med frysing. Det gir både bedre bryggeøkonomi og stor glede! Kom gjerne med ytterligere spørsmål.

Et par kommentarer:

Jeg mener fortsatt at det er uhensiktsmessig med 15 mL-rør, da disse tar lengre tid å tine. Opptiningsfasen er kanskje den mest kritiske delen av prosessen, og dannelse av intracellulære iskrystaller og/eller frie oksygenforbindelser er veldig skadelig for gjæren. Jeg vil anbefale å bruke en størrelse på 2.0 mL. Men det er ikke feil det du gjør, og det vil fungere.

121˚C i 15 minutter i trykkoker er industristandard sterilisering - veldig bra. Husk å ikke skru til lokkene under denne prosessen. Bruk eventuelt autoklavtape, eller annet festemiddel for å holde lokkene på plass.

Har du en fryser uten "defrost"-syklus? Jeg er ikke sikker på om kjølelementene vil beskytte godt nok under disse syklene. Anbefaler at rørene står i en isopropanolløsning eller lignende i fryseren.

Å inokulere en stor starter med en liten mengde gjær er i utgangspunktet ikke problematisk hvis du har vært nøye med hygienen. Men det tar mye lengre tid, og det blir mye vanskeligere for deg å finne ut om gjæren din har overlevd frysingen. Du får dessuten neppe 30 milliarder levende celler opp fra fryseren - mengden vil reduseres.

Jeg ville ikke gått rett på 5 liter hvis jeg var deg. Normalt begynner jeg med 150 mL og 2.0 milliarder celler. Selv der, kan det ta litt tid før man ser noen tydelig aktivitet.

Å blåse oksygen ned i kolben ved inokulering tror jeg er helt unødvendig, men det er sikkert et fint rituale.

Det virker som om du bruker unødvendig mye gjærnæring. Jeg pleier å tilsette 0.32 g. til 3.5 liter starter. Det er veldig langt fra en halv teskje.


Når jeg fryser gjær, bruker jeg sterile engangspipetter i plast (hvis jeg en sjelden gang trenger veldig nøyaktige mål, bruker jeg en mikropipette, men da må det være noe veldig kritisk som skal skje) til å hente ut gjær fra starteren før jeg brygger (henter aldri gjær fra ferdig brygg). Det er veldig viktig at gjæren er i dvalefase (G0) når den fryses, så den kan gjerne stå i kjøleskabet en stund. Jeg pleier å blande opp 50 mL av en stamløsing med glycerol i 30% konsentrasjon med destillert vann, som jeg har stående, og tilsetter til gjær som skal fryses. 50 mL holder veldig lenge når man bruker 2.0 mL-rør.
Dette lar jeg sedimentere i rørene i et døgn før jeg pipetterer av overskydende vædske, tilsetter glycerol, vender rørene 10-12 ganger, og derefter lar dem stå i kjøleskab en times tid for å sørge for å få en jevn blanding av gjærceller, vann og glycerol. Derefter vender jeg rørene 2-3 ganger til jeg har en homogen blanding, og fryser dem. Jeg har ikke noen sofistikert løsning for langsom nedfrysing.

Når gjæren skal brukes, henter jeg ett rør, tiner det i hånden i løbet av ca. 30 sekunder, og inokulerer direkte i 150 mL DME-løsning.

Et viktig råd: Vær raus med engangspipetter. Overføring og glyceroltilsetning medfører kontaminasjonsfare. Særlig om du fryser flere ulike gjærstammer samtidig, risikerer du krysskontaminasjon om du ikke er veldig nøyaktig. Å tilsette gjæren i rør med glycerolløsning eliminerer noe av denne faren, men ikke risikoen for kontaminasjon av andre mikroorganismer. Jobb i en ren - helst aseptisk sone. Man trenger ikke jobbe helt sterilt, men må være grundig.
Takker for gode svar.
Skjønner at jeg bør bruke 2 ml, og det skal absolutt prøves når desse er anskaffet.
Det blir nok da som du anbefaler, å steppe starterene gradvis fra de nedfryste rørene.

Har lekt med tanken om å bygge meg en egnet renroms boks (flow-hood) med hepafilter H13 eller H14. Dette vil vel redusere faren for kontaminasjon betraktelig vil jeg tro.

Skal uansett teste nedfrysing i de 15 ml rørene jeg har, ettersom det er dette jeg har nå. Blir uansett en læringsprosess dette.

Det er jo bare supert å ha så flinke fagfolk å spørre her på forumet .

Takker
 
Det gleder meg å høre at folk begynder med frysing. Det gir både bedre bryggeøkonomi og stor glede! Kom gjerne med ytterligere spørsmål.

Et par kommentarer:

Jeg mener fortsatt at det er uhensiktsmessig med 15 mL-rør, da disse tar lengre tid å tine. Opptiningsfasen er kanskje den mest kritiske delen av prosessen, og dannelse av intracellulære iskrystaller og/eller frie oksygenforbindelser er veldig skadelig for gjæren. Jeg vil anbefale å bruke en størrelse på 2.0 mL. Men det er ikke feil det du gjør, og det vil fungere.

121˚C i 15 minutter i trykkoker er industristandard sterilisering - veldig bra. Husk å ikke skru til lokkene under denne prosessen. Bruk eventuelt autoklavtape, eller annet festemiddel for å holde lokkene på plass.

Har du en fryser uten "defrost"-syklus? Jeg er ikke sikker på om kjølelementene vil beskytte godt nok under disse syklene. Anbefaler at rørene står i en isopropanolløsning eller lignende i fryseren.

Å inokulere en stor starter med en liten mengde gjær er i utgangspunktet ikke problematisk hvis du har vært nøye med hygienen. Men det tar mye lengre tid, og det blir mye vanskeligere for deg å finne ut om gjæren din har overlevd frysingen. Du får dessuten neppe 30 milliarder levende celler opp fra fryseren - mengden vil reduseres.

Jeg ville ikke gått rett på 5 liter hvis jeg var deg. Normalt begynner jeg med 150 mL og 2.0 milliarder celler. Selv der, kan det ta litt tid før man ser noen tydelig aktivitet.

Å blåse oksygen ned i kolben ved inokulering tror jeg er helt unødvendig, men det er sikkert et fint rituale.

Det virker som om du bruker unødvendig mye gjærnæring. Jeg pleier å tilsette 0.32 g. til 3.5 liter starter. Det er veldig langt fra en halv teskje.


Når jeg fryser gjær, bruker jeg sterile engangspipetter i plast (hvis jeg en sjelden gang trenger veldig nøyaktige mål, bruker jeg en mikropipette, men da må det være noe veldig kritisk som skal skje) til å hente ut gjær fra starteren før jeg brygger (henter aldri gjær fra ferdig brygg). Det er veldig viktig at gjæren er i dvalefase (G0) når den fryses, så den kan gjerne stå i kjøleskabet en stund. Jeg pleier å blande opp 50 mL av en stamløsing med glycerol i 30% konsentrasjon med destillert vann, som jeg har stående, og tilsetter til gjær som skal fryses. 50 mL holder veldig lenge når man bruker 2.0 mL-rør.
Dette lar jeg sedimentere i rørene i et døgn før jeg pipetterer av overskydende vædske, tilsetter glycerol, vender rørene 10-12 ganger, og derefter lar dem stå i kjøleskab en times tid for å sørge for å få en jevn blanding av gjærceller, vann og glycerol. Derefter vender jeg rørene 2-3 ganger til jeg har en homogen blanding, og fryser dem. Jeg har ikke noen sofistikert løsning for langsom nedfrysing.

Når gjæren skal brukes, henter jeg ett rør, tiner det i hånden i løbet av ca. 30 sekunder, og inokulerer direkte i 150 mL DME-løsning.

Et viktig råd: Vær raus med engangspipetter. Overføring og glyceroltilsetning medfører kontaminasjonsfare. Særlig om du fryser flere ulike gjærstammer samtidig, risikerer du krysskontaminasjon om du ikke er veldig nøyaktig. Å tilsette gjæren i rør med glycerolløsning eliminerer noe av denne faren, men ikke risikoen for kontaminasjon av andre mikroorganismer. Jobb i en ren - helst aseptisk sone. Man trenger ikke jobbe helt sterilt, men må være grundig.
Har funnet 2 ml rør av PP plast på ebay. Desse tåler 121 grader.
Ser også de har sentrifugerør med flip-åpning som er noe rimligere. Hvilke bør jeg satse på?
Vedrørende engangspipetter bør vel desse vere sterile og enkelpakket?
 

Vedlegg

  • F552463B-5B34-480B-A31D-A0609A951880.jpeg
    F552463B-5B34-480B-A31D-A0609A951880.jpeg
    128,7 KB · Sett: 7
  • 078468DE-90E3-421B-9EA6-F7474B615FBE.jpeg
    078468DE-90E3-421B-9EA6-F7474B615FBE.jpeg
    416,5 KB · Sett: 7
Det gleder meg å høre at folk begynder med frysing. Det gir både bedre bryggeøkonomi og stor glede! Kom gjerne med ytterligere spørsmål.

Et par kommentarer:

Jeg mener fortsatt at det er uhensiktsmessig med 15 mL-rør, da disse tar lengre tid å tine. Opptiningsfasen er kanskje den mest kritiske delen av prosessen, og dannelse av intracellulære iskrystaller og/eller frie oksygenforbindelser er veldig skadelig for gjæren. Jeg vil anbefale å bruke en størrelse på 2.0 mL. Men det er ikke feil det du gjør, og det vil fungere.

121˚C i 15 minutter i trykkoker er industristandard sterilisering - veldig bra. Husk å ikke skru til lokkene under denne prosessen. Bruk eventuelt autoklavtape, eller annet festemiddel for å holde lokkene på plass.

Har du en fryser uten "defrost"-syklus? Jeg er ikke sikker på om kjølelementene vil beskytte godt nok under disse syklene. Anbefaler at rørene står i en isopropanolløsning eller lignende i fryseren.

Å inokulere en stor starter med en liten mengde gjær er i utgangspunktet ikke problematisk hvis du har vært nøye med hygienen. Men det tar mye lengre tid, og det blir mye vanskeligere for deg å finne ut om gjæren din har overlevd frysingen. Du får dessuten neppe 30 milliarder levende celler opp fra fryseren - mengden vil reduseres.

Jeg ville ikke gått rett på 5 liter hvis jeg var deg. Normalt begynner jeg med 150 mL og 2.0 milliarder celler. Selv der, kan det ta litt tid før man ser noen tydelig aktivitet.

Å blåse oksygen ned i kolben ved inokulering tror jeg er helt unødvendig, men det er sikkert et fint rituale.

Det virker som om du bruker unødvendig mye gjærnæring. Jeg pleier å tilsette 0.32 g. til 3.5 liter starter. Det er veldig langt fra en halv teskje.


Når jeg fryser gjær, bruker jeg sterile engangspipetter i plast (hvis jeg en sjelden gang trenger veldig nøyaktige mål, bruker jeg en mikropipette, men da må det være noe veldig kritisk som skal skje) til å hente ut gjær fra starteren før jeg brygger (henter aldri gjær fra ferdig brygg). Det er veldig viktig at gjæren er i dvalefase (G0) når den fryses, så den kan gjerne stå i kjøleskabet en stund. Jeg pleier å blande opp 50 mL av en stamløsing med glycerol i 30% konsentrasjon med destillert vann, som jeg har stående, og tilsetter til gjær som skal fryses. 50 mL holder veldig lenge når man bruker 2.0 mL-rør.
Dette lar jeg sedimentere i rørene i et døgn før jeg pipetterer av overskydende vædske, tilsetter glycerol, vender rørene 10-12 ganger, og derefter lar dem stå i kjøleskab en times tid for å sørge for å få en jevn blanding av gjærceller, vann og glycerol. Derefter vender jeg rørene 2-3 ganger til jeg har en homogen blanding, og fryser dem. Jeg har ikke noen sofistikert løsning for langsom nedfrysing.

Når gjæren skal brukes, henter jeg ett rør, tiner det i hånden i løbet av ca. 30 sekunder, og inokulerer direkte i 150 mL DME-løsning.

Et viktig råd: Vær raus med engangspipetter. Overføring og glyceroltilsetning medfører kontaminasjonsfare. Særlig om du fryser flere ulike gjærstammer samtidig, risikerer du krysskontaminasjon om du ikke er veldig nøyaktig. Å tilsette gjæren i rør med glycerolløsning eliminerer noe av denne faren, men ikke risikoen for kontaminasjon av andre mikroorganismer. Jobb i en ren - helst aseptisk sone. Man trenger ikke jobbe helt sterilt, men må være grundig.
Har funnet 2 ml rør av PP plast på ebay. Desse tåler 121 grader.
Ser også de har sentrifugerør med flip-åpning som er noe rimligere. Hvilke bør jeg satse på?
Vedrørende engangspipetter bør vel desse vere sterile og enkelpakket
Jeg kjøpte 1.5 ml Eppendorfrør fra Labdidakt i Drammen. Kr. 85 for 500. De har også alt annet du trenger til frysing av gjær.
Takker.
Er engangspipettene derfra sterile, eller må de steriliseres før bruk?
Er 1,5 eppendorør store nok? Vi begynner nå å komme ned på lupe-nivå :)
Tenker da mest på å treffe :)
 

Reinhard10

Norbrygg-medlem
Er engangspipettene derfra sterile
Det vet jeg ikke. Jeg planlegger å koke alt jeg bruker i en trykkoker hver gang.
1.5 ml rør er det Rosnes anbefaler og han er vel den som vet mest om disse tingene her på nettet.
Han sier at det er viktig at oppvarming fra frosen tilstand skjer fort og et 1.5 ml rør kan du hurtig varme opp i hånden.
 
Det vet jeg ikke. Jeg planlegger å koke alt jeg bruker i en trykkoker hver gang.
1.5 ml rør er det Rosnes anbefaler og han er vel den som vet mest om disse tingene her på nettet.
Han sier at det er viktig at oppvarming fra frosen tilstand skjer fort og et 1.5 ml rør kan du hurtig varme opp i hånden.
Ja jeg ser den, og det var jo billig for 500 da. Spørs om det ikke blir en bestilling derifra gitt :)
Prøver engangspipettene derifra også, når jeg først bestiller.

Ups... en frakt på over 300 ?? Da spørs det hva jeg gjør.
 
Sist redigert:
Er 1,5 eppendorør store nok?
1.5 ml rør er det Rosnes anbefaler og han er vel den som vet mest om disse tingene her på nettet.
Strengt tatt har jeg vel anbefalt 2.0 mL. Men 1.5 fungerer sikkert fint. Grunnen til at jeg ikke bruker så små rør, er at volumet blir så vidt lite at jeg ser det som en mulig risiko når man ikke har en biofryser på -80 grader eller kaldere - eller i det minste ikke har en fryser uten avfrostingssykler.
Gjæren blir litt mer sårbar i så små volumer, men om det har noen praktisk betydning, er jeg usikker på.

Om jeg er den som vet mest om disse tingene her, vet jeg ikke. Jeg er definitivt ikke den som vet mest om det på nettet (sic!).
Ser også de har sentrifugerør med flip-åpning som er noe rimligere. Hvilke bør jeg satse på?
Jeg bruker sentrifugerør. De er helt utmerkede til formålet.
Er engangspipettene derfra sterile, eller må de steriliseres før bruk?
De trenger nok ikke å være helt sterile, men bør i det minste være aseptiske. Jeg steriliserer ikke engangspipetter, men gir dem en liten runde med starsan eller lignende før bruk. Hvis de er fornuftig oppbevart, er det nok liten risiko. RIsikoen for kontaminasjon er mye større under bruk.
 
Sist redigert:

Børre Aursnes

Norbrygg-medlem
Jeg har basert meg på noen små reagensglass i et stativ, men det tar uforholdsmessig fryseboksen. De er høye og tynne og rommer lite, men nok til å få i gang starteren. Men som sagt gjør form og oppstilling i et stativ at de tar uforholdsmessig mye plass. Hva bruker dere andre?
 
Så denne tråden nå og vil dele mine erfaringer med å fryse gjær.

Er akkurat nå i gang med å lage starter på en lagergjær som har ligget i fryseren i ca. 6 mnd. og så langt ser det veldig lovende ut (2. brygg på frossen gjær).

Jeg har benyttet metoden beskrevet i "Yeast" av Chris White hvor jeg benytter en 50/50 miks av YPD og 100% Glyserol, og mikser dette 50/50 med "slurry" (5 ml gjær og 5 ml YPD/Glyserol miks) i 15 ml rør.
Noen andre som har benyttet YPD?

Etter at jeg har tilsatt gjær i mixen setter jeg de i kjøleskapet i 1 - 2 døgn før jeg setter de inn i dypfryseren, i en mini frysebag som jeg har ekstra isolert med isopor. Mellom veggen på kjølebagen og isoporen har jeg lagt inn et par poser med spylerveske som er blandet til å fryse ved ca. - 20 grader, dette for å sikre at defrost syklusen ikke påvirker gjæren (Fryseren er satt til -23). Rørene tiner i løpet av ca. 1 min. med "håndvarme".

Desinfiserer rør og YPD/Glyserolmiks gjennom 15 min i trykkoker (ved ca. 120 grader).
Benytter glass pimpetter som vaskes godt (bløtlegges) i craftclean, skylles godt og oppbevares deretter i starsan inntil jeg har bruk for de, da de er for lange til å legge i trykk-kokeren.

Ettersom jeg sannsynligvis kan beskyldes for å være litt i overkant glad i dippedutter ;-) har jeg også investert i et mikroskop, der jeg teller gjærceller for hvert steg i starter prosessen og dokumenterer resultatene i min gjærlogg.
På den jeg jobber med nå estimerte brewersfriend.com at jeg burde få ca. 48B celler ut av det første steget (150 ml 1036 vørter med 38B celler fra røret) endte opp med 68B celler etter ca. 1 døgn.

Hva tror dere om min måte å fryse gjær på, noen kommentarer?
 
  • Like
Reaksjoner: Mc.

Reinhard10

Norbrygg-medlem
Hva tror dere om min måte å fryse gjær på, noen kommentarer?
Min metode er veldig lik din, men jeg bruker en blanding av distillert vann/Glyserol. Jeg bruker også mindre rør (1.5 ml) og en-gangs plastikk pipetter. Ellers er steriliseringmetoden lik din. Jeg forstår ikke hvorfor du bruker YPD. Gjæren skal jo være i dvale når den fryses ned.
Jeg hadde et problem da jeg satte mixen i kjøleskapet i 2 dager før jeg satte dem i fryseren. Mixen skilte seg med gjæren i bunnen av røret og glyserolen i toppen og jeg måtte riste godt for at det skulle blande seg igjen. Nå setter jeg mixen direkte i fryseren.
Det er mitt første forsøk med frysing av gjær. Jeg har 4 forskjellige gjær i fryseren som jeg skal "vekke" når jeg begynner å brygge igjen i August.
 
Min metode er veldig lik din, men jeg bruker en blanding av distillert vann/Glyserol. Jeg bruker også mindre rør (1.5 ml) og en-gangs plastikk pipetter. Ellers er steriliseringmetoden lik din. Jeg forstår ikke hvorfor du bruker YPD. Gjæren skal jo være i dvale når den fryses ned.
Jeg hadde et problem da jeg satte mixen i kjøleskapet i 2 dager før jeg satte dem i fryseren. Mixen skilte seg med gjæren i bunnen av røret og glyserolen i toppen og jeg måtte riste godt for at det skulle blande seg igjen. Nå setter jeg mixen direkte i fryseren.
Det er mitt første forsøk med frysing av gjær. Jeg har 4 forskjellige gjær i fryseren som jeg skal "vekke" når jeg begynner å brygge igjen i August.
Et par grunner til at jeg benytter YPD:
1: dette er andre forsøket mitt med å fryse gjær, på første forsøket benyttet jeg destillert vann og glyserol, men klarte ikke å få liv i gjøren igjen etter tining (ikke sikker på om vann/glyserol blandingen var årsaken, men...)
2: Leste dette i Yeast boken til Chris White, der han spesifiserer bruk av YPDYOD 1.PNG
Kanskje det er noen her inne som kan mer om biologi som kan gi en forklaring på hvorfor det anbefales å benytte YPD?
I alle fall så er min erfaring nå at Gjæren som er fryst med denne miksen våkner raskt til live igjen.

Jeg har også erfart at gjæren bunnfeller i kjøleskapet, snur rørene et par ganger før jeg setter de i fryseren, men de bunnfeller igjen i innfrysningsprosessen, ser ikke ut som dette påvirker gjæren i noen grad.

Første brygget med frossen gjær ble helt utmerket, og gjæren jeg nå har satt starter på utvikler seg helt fint og lukter helt riktig (har lest at gjær som er infisert stort sett har en helt annen/ubehagelig lukt)
 

Reinhard10

Norbrygg-medlem
Et par grunner til at jeg benytter YPD:
1: dette er andre forsøket mitt med å fryse gjær, på første forsøket benyttet jeg destillert vann og glyserol, men klarte ikke å få liv i gjøren igjen etter tining (ikke sikker på om vann/glyserol blandingen var årsaken, men...)
2: Leste dette i Yeast boken til Chris White, der han spesifiserer bruk av YPDVis vedlegget 57549
Kanskje det er noen her inne som kan mer om biologi som kan gi en forklaring på hvorfor det anbefales å benytte YPD?
I alle fall så er min erfaring nå at Gjæren som er fryst med denne miksen våkner raskt til live igjen.

Jeg har også erfart at gjæren bunnfeller i kjøleskapet, snur rørene et par ganger før jeg setter de i fryseren, men de bunnfeller igjen i innfrysningsprosessen, ser ikke ut som dette påvirker gjæren i noen grad.

Første brygget med frossen gjær ble helt utmerket, og gjæren jeg nå har satt starter på utvikler seg helt fint og lukter helt riktig (har lest at gjær som er infisert stort sett har en helt annen/ubehagelig lukt)
Hvor kjøper du YPD?
 
Hvor kjøper du YPD?
Lager den selv etter denne oppskriften:
1 liter vann (deionisert/sterilt)
20 g Peptone G (bestilt på Ebay)
10 g Yeast extract (bestilt på Ebay)
20 g Dextrose
1 g Askobin syre (c vitamin)

Normalt nedskalerer jeg denne oppskriften til 100 ml etter som jeg ikke har behov for en full liter.

Har funnet noen utgaver av YPD/YEPD på nettet også, men disse er ofte tilsatt Agar (benyttes til å dyrke celler på plater), tror ikke den kan benyttes til dette formålet.
 
Topp